家畜衛生試驗所生物研究組助理研究員 黃春申

　　副結核病（或稱約內氏病 Johne’s disease ）是由副結核分支桿菌（ Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis, MAP ）所引起之反芻動物慢性下痢性疾病。病原大小為 0.5 μ m x 1-2 μ m ，為革蘭氏陽性及抗酸染色陽性之細菌，不形成孢子，不具莢膜，也不具運動性。 1895 年 Johne 及 Frothingham 首次觀察到副結核分支桿菌 引起 腸道之肉芽腫性腸炎。首先出現於牛，之後陸續發現於綿羊、山羊以及其他養殖或野生的反芻動物，目前在馬、豬、鹿、羊駝、兔子、狐狸及鼬鼠等動物也有報告，是世界性的疾病，且於各地造成嚴重之經濟損失。在自然環境下，感染途徑主要是食入污染之食物，而幼畜是食入被污染的乳汁，此外可垂直感染胎兒，精液也會帶菌。所以帶原動物移入健康群體後會造成此病的難以消滅。

　　副結核病臨床症狀主要是慢性漸進性消耗及下痢。在牛感染初期的病症是週期間歇性下痢，病原在小腸壁增殖，病灶常侷限於小腸壁以及腸繫膜淋巴結，隨病程演進及個體差異，病畜抗體產生後可能完全排除病原，或持續性感染變成外表健康的次臨床期動物。部份動物的病原則持續增殖，慢慢造成病灶擴大、腸道代謝的干擾以及症狀的出現，肉眼病變可見於迴腸、空腸、小腸末端、盲腸、結腸等處。而在其他小反芻獸，下痢比較少見。小腸的病灶會造成蛋白質漏失及吸收不良症，導致產乳量下降及肌肉消耗等經濟損失。次臨床期動物會由糞便持續排出不等量的病原菌，而發病動物糞便中更含有大量的病原。這些早期感染及次臨床期動物讓 本病有冰山效應的特性，一旦有一頭臨床病症的動物出現，代表著已經有一群動物被感染但卻未顯出症狀，如果 5% 死亡率發生時，即可推斷約有 50% 的動物已受感染。

　　依據 2008 年 OIE 診斷手冊，本病檢測方法有糞便抹片、糞便及組織細菌分離、糞便與組織的 DNA 探針、血清學、屍體解剖以及組織病理學。細菌分離在技術上最具難度並且相當耗時（約 12 週或更久），但細菌分離仍是唯一不會有偽陽性問題的方法。以固體培養基自糞便分離副結核分支桿菌的方法，只能檢測出約 30-40% 感染的動物。 實驗室分離副結核分支桿菌需要抗生素抑制雜菌生長後接種於含分支桿菌素（ mycobactin ）之蛋黃培養基，培養 6-8 週或更久，分支桿菌素依賴性一直被當成副結核分支桿菌之重要鑑定依據。血清及乳汁抗體檢驗亦是重要的診斷工具， 包括補體結合試驗 （ complement fixation, CF ） 、 ELISA （ enzyme-linked immunosorbent assay ） 及 AGID （ agar gel immunodiffusion ）， 其中以 ELISA 最 敏感。 這些抗體檢驗簡單快速，適用於大範圍篩檢，但初步診斷出的陽性病例尚須仰賴其他方法確認，這些方法包括病灶處的壓片觀察到抗酸性染色病原、顯微鏡下的病變特徵或分離得副結核分支桿菌等。此外抗體的檢驗方法只適用於病灶及臨床症狀出現後之病例，感染早期與次臨床期動物常會被忽略，這些動物持續排出病原但卻無法被檢測出來，這就是本病難控制之處。

　　近年，藉由細菌培養技術的改進及 PCR 技術的應用，證實某些人類克隆氏病（ Crohn’s disease ）病患的組織中有副結核分支桿菌之存在，以及患者檢出副結核陽性抗體，因此推測兩種疾病間可能有某程度的關連。

　　台灣副結核病盛行率調查早在 1987 年便有針對牛隻血清進行 ELISA 檢測，陽性率為 3.5% 。而 1998 年針對牛及山羊血清 ELISA 檢測，陽性率分別為 6.9% 及 2% 。於 2001 年以糞便分離細菌的方法檢測乳牛，盛行率為 1.8% ，場陽性率為 7.1% 。而本會家畜衛生試驗所 2004 年針對肉牛的研究中，補體結合試驗的陽性率為 12.5% ，敏感性 100% ，特異性 90.8% 。又在 2009 年針對台灣乳牛場之調查，血清陽性率 9.3% 。由以上可知血清陽性率有不斷上升之趨勢，需要養殖戶與防疫單位密切注意。

　　由於本病會有無症狀的次臨床期，且尚無正確有效的檢驗方法，所以本病控制相當不易，而撲滅計畫更難有成效。因此在預防上應要徹底地進行環境衛生清潔，引進未感染之動物，並且儘快篩出並淘汰感染動物，避免糞便中病原污染食料造成牧場內循環感染。本病出現臨床症狀者通常無法復原，會慢性消瘦後死亡，曾有病例用多種抗生素治療後雖可改善，但無法治癒。 目前國際上已有副結核病的疫苗用以減低臨床症狀，但卻無法防止感染，且疫苗免疫會干擾牛結核病的診斷及控制計畫，因此不建議使用。