家畜衛生試驗所 李燕霖

一 . 前言

　　牛流行熱是由桿狀病毒（ Rhabdovirus ）所引起之急性發熱性疾病，在牛之間並不會經由直接接觸、體液或空氣傳染，須透過庫蠓等吸血性節肢動物做為媒介來傳播疾病，目前僅有一種血清型， 以乳牛、黃牛、水牛為主要宿主，但亦曾在鹿及羚羊體內發現有牛流行熱的抗體存在，目前沒有感染人的病例報告。 牛流行熱病毒屬單股 RNA 病毒，結構包括封套與五個結構性蛋白（ L 、 G 、 N 、 M1 與 M2 ），其中又以 G 蛋白最重要，因為此蛋白含病毒的專一性及中和性抗原部位，可引發牛隻的免疫反應並保護牛隻不受感染。 在臨床上， 病牛會出現高熱、開口呼吸、流涎、四肢僵硬、跛足、關節疼痛等症狀，其中泌乳量遽減常造成重大損失。

　　1967 年台灣首次出現疫情後，分別在 1983 、 1989 、 1996 、 1999 、 2001 、 2004 、 2007 年又有疫情發生，可見本病平均每幾年流行一次，呈現周期性爆發 現象 ，而間隔似乎有縮短的趨勢， 過往發生的型態多是大流行， 1999 年後則變成散發，並多集中於夏秋兩季，甚至到十月份仍有病例發現，與氣候變遷的暖化效應及颱風後病媒蚊數量增加是否相關，十分值得探討。 防治之道除加強防治病媒蚊外，更需藉助疫苗免疫牛隻以產生抗體對抗病毒，根據研究，血清中和抗體力價需大於或等於 32 倍才能有較好的保護效力不被野外病毒感染。

二 . 活毒疫苗研發

　　台灣目前施打之疫苗為不活化疫苗，乃 將病毒經化學方法處理使其失去複製、繁殖能力，優點是安全性高，因為病毒不會感染細胞進行增殖，所以無毒力恢復和潛伏感染之疑慮，但也因此，不活化疫苗中的病毒為外源性抗原， 僅能刺激體液免疫， 抗體在經過一段時間後會自然慢慢的衰退， 初生小牛接種第一劑疫苗數週後必須補強第二劑，之後每年亦需補強注射， 不斷刺激抗體產生， 才能達到理想免疫效果 。

　　日本方面曾研究指出，以 YHL 株活毒疫苗搭配不活化疫苗的方法免疫牛隻安全性高，毒力減弱的病毒雖然本身誘發中和抗體的能力不高，但其具有的致敏作用（ priming effect ）卻可使牛隻對於之後施打的不活化疫苗迅速產生反應，製造出大量的中和抗體，甚至 10 TCID₅₀ 的病毒量即具有致敏作用。為防範牛流行熱疫情造成養牛戶經濟上嚴重損失，除現有之不活化疫苗外，本會家畜衛生試驗所（畜衛所）利用分讓自日本之牛流行熱活毒疫苗病毒 YHL 株研發活毒疫苗以加強基礎免疫，逐步完成活毒疫苗之各項試驗，冀能生產具良好免疫性之活毒疫苗以有效預防疾病。

三 . 研發成果

　　病毒增殖採用 HmLu-1 細胞， 先進行 細胞生長試驗以瞭解細胞生長速度 ，之後再建立病毒增殖曲線。發現在 175 平方公分（ 175T ）之 細胞角瓶與 850 平方公分旋轉培養瓶分別種入 5×10⁶ 與 5×10⁷ 個細胞 2 天後可以形成單層細胞，形成單層細胞後即可接種病毒，病毒力價不論是在角瓶或旋轉培養之細胞皆於接種 2 天後達最高，約為 10⁷ TCID₅₀/mL 。

　　在安全試驗中，選定牛流行熱抗體陰性之 6 月齡娟姍牛三頭及荷蘭乳牛兩頭，於試驗前 7 天開始每日 2 次量測肛溫以記錄體溫變化，牛隻於皮下注射 YHL 病毒後再持續量測體溫 14 天，同時觀察牛隻是否出現任何異狀或不良反應，結果五頭牛在 14 天內並未出現發熱或其他不良反應。而完成安全性試驗之牛隻繼續進行效力試驗，於 YHL 病毒注射 3 週後以本所生產之牛流行熱不活化疫苗經肌肉注射 1 劑量完成基礎免疫，接著牛隻於 YHL 疫苗 注射後第 4 週再注射本所生產之牛流行熱不活化疫苗，結果發現血清中和抗體力價開始快速上升，於實驗第 6-7 週上升至高峰，抗體中和力價可達 128 倍與 256 倍，之後就逐漸下降， 於半年後再補強一次不活化疫苗，抗體又會快速上升，可達 512 倍與 256 倍 。試驗結果顯示 YHL 活毒除安全外，與不活化疫苗搭配使用誘發抗體產生的能力亦具有不錯的效果。

四 . 討論

　　曾有文獻針對牛流行熱病毒可誘發中和抗體產生的 G 蛋白進行基因序列分析，結果發現亞洲株與澳洲株為不同的基因群，而亞洲株又可區分成台灣株與日本株兩個基因群。因此以分讓自日本的 YHL 病毒株製造之活毒疫苗，是否適合在台灣使用，在未來推廣上將是一值得重視的議題，惟畜衛所將㎜製造不活化疫苗所使用的 Vac-1984 與 YHL 做比較，兩者 G 蛋白核酸相似度高達 97 % 。以高免血清進行血清交叉中和試驗，也發現以 YHL 病毒進行連續免疫，產生的抗體亦能有效中和 Vac-1984 病毒，且與中和 YHL 的能力不相上下，顯示抗體具有交叉保護的效果，因此以 YHL 研發活毒疫苗應無效力上的疑慮。

五 . 結語

　　疾病的發生需要在宿主、病原與環境三者皆具備條件之下才會出現，因此只要能阻斷其中任兩者之間的連結，就能避免疾病的爆發與傳播。牛流行熱在台灣已成為常在病，過去幾次的疫情，除了與環境中極難根除的病媒蚊有關外，不確實的免疫注射也造成牛群體內缺乏一致的抗體保護力，因此一旦被畜舍周圍帶有病毒的庫蠓叮咬，疫情就此爆發，尤其台灣的畜牧場多處於田間，雜草林木叢生提供了蚊蟲極佳的隱匿場所，在無法保證牛群不會被叮咬的情況之下，加強疫苗的預防接種就極為重要了，若能再配合病媒蚊數量的控制，雙管齊下，才能有效達到防治目的。

　　而開發活毒疫苗的目的是希望能同時誘發細胞與體液免疫以彌補不活化疫苗的不足，活毒本身刺激抗體產生的效果或許不佳，但若能引起細胞免疫，產生免疫記憶細胞，甚至直接激化細胞毒殺效果，即使中和抗體力價不高或維持時間不盡理想，仍有其他途徑可對抗病毒。在本文中本會畜衛所，使用 YHL 株做為活毒疫苗對於牛隻的安全性高且搭配不活化疫苗誘發抗體產生的能力更佳，未來希望能盡速完成研發以供使用。

圖 1 YHL 牛隻安全性試驗。牛隻體溫變化，上午下午各量測一次體溫，於第 0 天施打 YHL 病毒。 1 、 2 、 3 為三頭娟姍牛， A 、 B 為兩頭荷蘭牛

圖 2 以 牛流行熱疫苗免疫注射荷蘭牛和娟姍牛後之 血清中和抗體力價變化。 第一次免疫定為第 0 週，施打 YHL 活病毒，第二次免疫則在第 3 週完成採集血液樣本後，施打本所生產之牛流行熱不活化疫苗，接著於半年後再次施打本所生產之牛流行熱不活化疫苗